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人教2003课标版《1.2基因工程的基本操作程序》新课标PPT课件优质课下载
思考:PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶,下面的表达式能否正确反映DNA聚合酶的功能?_____这是因为__________
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拓展信息——忠实的DNA聚合酶
DNA聚合酶不能从头合成DNA,因为它具有保证DNA准确复制的使命。这就要求,在子链的延伸过程中,只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续子链的延伸,否则延伸终止,启动切除修复机制,直至添加正确的碱基。即在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链才能继续下游DNA的合成,这是它的忠实性和高保真系统决定的。
DNA聚合酶只从5‘端向3’端进行核苷酸的聚合反应。
疑点1: PCR中的酶问题
思考:PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶,下面的表达式能否正确反映DNA聚合酶的功能?_____这是因为__________
_____________________________。
不能
DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上
疑点2: PCR中的引物问题
思考:如图所示为供体生物中的某条DNA片段。假设其中包含分别与以下4对引物互补的碱基序列,请思考并回答下列问题:(图中A1’、A2’、B1’、B2’是分别与引物A1、A2、B1、B2互补的序列。)
(1)哪对引物设计不合理?为什么?
(1)哪对引物设计不合理?为什么?
引物对C,因为引物C1和C2局部发生碱基互补配对而失效。
引物对D,因为引物D1自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。
(2)若要扩增目的基因应选择引物对__。
B
(3)至少经过______次循环复制过程,才可从DNA分子中分离出目的基因片段。
3
(4)引物对A和引物对B与模板链结合时所采用的退火温度是否相同?为什么?
疑点3: PCR中的计算问题
思考:利用PCR技术扩增目的基因,其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段,它是子链合成延伸的基础。从理论上推测,第四轮循环产物中含有引物B1的DNA片段所占的比例为________。
B1
B2