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4、蛋白质工程Ⅰ
一、基因工程的概念基因工程是 指按照人们的 愿望，通过体外DNA重组和转基因技术，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基因工程是在 水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。
（一）基因工程的基本工具
1.“分子手术刀”——
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
（2）功能：能够识别双链DNA 分子的某种特 定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 ，因此具有专一性。
（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：
2.“分子缝合针”——
（1）功能：缝合
（2）与DNA聚合酶作用的异同: DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。
3.“分子运输车”——
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）最常用的载体是 ,它是一种有自我复制能力的双链环状DNA分子。
（3）其它载体： 噬菌体、动植物病毒
(二)基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1.目的基因是指： 编码蛋白质的基因 。
2.原核基因采取直接分离法获得，真核基因是人工合成法。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
限制酶 运载体
直接分离法：供体细胞中的DNA→ DNA片段→ 受体细胞→DNA片段扩增
反转录法：逆转录 合成
mRNA → 单链DNA → 双链DNA
化学合成法：根据已知的蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA 序列，推测出结构基因的核苷酸序列，再通过化学方法，合成目的基因。
第二步：重组载体的构建
1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用