人教2003课标版《复习与测试》精品优质课教案设计

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下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

1、一个图1所示的质粒分子经Hind IIⅠ 酶切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团，切割后产生的末端是 末端。

2、用图中质粒和目的基因构建重组质粒（基因表达载体）：

①不能使用BamH I酶切割，原因是 。

②从后续基因表达载体的构建的角度考虑，应选用 两种限制酶切割，使用这两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点是 。

3、BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端 （是/否）可以连接，说明DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列 （有/没有）专一性要求。若可以连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

4、下图表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列。SmaⅠ限制性核酸内切酶识别的碱基序列和酶切位点为CCC↓GGG。

①若用限制酶SmaⅠ完全切割图中DNA片段，其产物长度为 。

②若图1中虚线方框内的碱基对被T－A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子分离出右图及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有_____种不同长度的DNA片段。

四、从DNA分子的功能看基因工程

【课堂小练二】

人金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

1、目的基因的获取：从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过 获得________用于PCR扩增。用 PCR 方法扩增目的基因时 （需要/不需要）知道基因的全部序列。

2、设计引物：

①设计 种引物，设计的引物序列需要分别与 互补配对。

②上图第1组引物（只标注了部分碱基序列）的不合理之处是 。

③上图第2组引物（只标注了部分碱基序列）的不合理之处是 。

④为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的 位点。

3、过程：图中步骤1代表变性，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。

①退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏 的碱基配对。

②退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但 的引物需要设定更高的退火温度。

③如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________。

A、升高退火温度 B、降低退火温度 C、重新设计引物

4、拓展：

①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 。