微生物的筛选和计数

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、分解纤维素的微生物的分离、筛选菌株和统计菌落数目的方法等内容，有关微生物的筛选和计数知识点详情如下：

1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

项目	详细内容
实验 原理	①能合成脲酶的细菌才能分解尿素 ②配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌
数量 统计	①直接计数法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板) ②间接计数法：稀释涂布平板法
实验流程	土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数

 

2.分解纤维素的微生物的分离

(1)纤维素酶

①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C₁酶、C_x酶和葡萄糖苷酶。

②作用：

 

(2)纤维素分解菌的筛选

①原理：

 

②筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

③培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

④实验流程

土壤取样：富含纤维素的环境

↓

选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度

↓

梯度稀释：制备系列稀释液

↓

涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

↓

挑选产生透明圈的菌落

(3)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较

分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。

①选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。

②鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培养基。

3．结果分析与评价

 

内容	现象	结论
有无杂 菌污染 的判断	对照的培养皿中无菌落生长	未被杂菌污染
	培养物中菌落数偏高	被杂菌污染
	菌落形态多样，菌落数偏高	培养物中混入其他氮源
选择培养基的筛选作用	牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目	选择培养基具有筛选作用
样品的稀 释操作	得到2个或2个以上菌落数目在30～300的平板	操作成功
重复组 的结果	若选取同一种土样，统计结果应接近

4．筛选菌株

(1)原则：人为提供有利于目的菌生长的条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)筛选分解尿素的细菌与分解纤维素的微生物的比较：

 

项目	土壤中分解尿素的 细菌的分离	分解纤维素的 微生物的分离
选择培 养基	以尿素为唯一氮源的 选择培养基	以纤维素为唯一 碳源的选择培养基
鉴定 方法	在培养基中加入酚红示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素	刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈
特有 代谢 过程	CO(NH2)2＋H2OCO2＋2NH3	纤维素纤维二糖葡萄糖

 

5.统计菌落数目的方法

(1)显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。

②方法：用计数板计算。

③缺点：不能区分死菌和活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作：

a．设置重复组，增强实验的说服力与准确性。

b．为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

 ③计算公式：每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。