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微生物的筛选和计数

考点详解

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数、分解纤维素的微生物的分离、筛选菌株和统计菌落数目的方法等内容,有关微生物的筛选和计数知识点详情如下:

1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

项目

详细内容

实验

原理

①能合成脲酶的细菌才能分解尿素

②配制以尿素为唯一氮源的培养基,能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌

数量

统计

直接计数法(显微镜下用特定细菌计数板或血细胞计数板)

②间接计数法:稀释涂布平板法

实验流程

土壤取样→配制土壤溶液和制备培养基→系列稀释→涂布平板与培养→菌落计数

 

2.分解纤维素的微生物的分离

(1)纤维素酶

①组成:纤维素酶是一种复合酶,一般认为它至少包括三种组分,即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶

②作用:

 

(2)纤维素分解菌的筛选

①原理:

 

②筛选方法:刚果红染色法,即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

③培养基:以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

④实验流程

土壤取样:富含纤维素的环境

选择培养:用选择培养基培养,以增加纤维素分解菌的浓度

梯度稀释:制备系列稀释液

涂布平板:将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

挑选产生透明圈的菌落

(3)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较

分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基,再用鉴别培养基。

①选择培养基为液体培养基,以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长,而其他绝大多数微生物不能正常生长。

②鉴别培养基含琼脂,为固体培养基,细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培养基。

3.结果分析与评价

 

内容

现象

结论

有无杂

菌污染

的判断

对照的培养皿中无菌落生长

未被杂菌污染

培养物中菌落数偏高

被杂菌污染

菌落形态多样,菌落数偏高

培养物中混入其他氮源

选择培养基的筛选作用

牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目

选择培养基具有筛选作用

样品的稀

释操作

得到2个或2个以上菌落数目在30~300的平板

操作成功

重复组

的结果

若选取同一种土样,统计结果应接近

4.筛选菌株

(1)原则:人为提供有利于目的菌生长的条件,同时抑制或阻止其他微生物的生长。

(2)筛选分解尿素的细菌与分解纤维素的微生物的比较:

 

项目

土壤中分解尿素的

细菌的分离

分解纤维素的

微生物的分离

选择培

养基

以尿素为唯一氮源的

选择培养基

以纤维素为唯一

碳源的选择培养基

鉴定

方法

在培养基中加入酚红示剂,若指示剂变红,pH升高,说明细菌能分解尿素

刚果红染色法,即刚果红与纤维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈

特有

代谢

过程

CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3

纤维素纤维二糖葡萄糖

 

5.统计菌落数目的方法

(1)显微镜直接计数法

①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。

②方法:用计数板计算。

③缺点:不能区分死菌和活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②操作:

a.设置重复组,增强实验的说服力与准确性。

b.为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。

 ③计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷VM,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。

 
最后编辑:2021-04-01 08:43:14

相关知识点

典型例题

【第1题】  

为获得果胶酶高产菌株,科研人员进行了下列分离、筛选、鉴定工作。

(1)为分离果胶酶产生菌,科研人员配制了下表所示成分的培养基,该表空白处的两种成分是________。制备的培养基常用________法进行灭菌。

K2HPO4

MgSO4

NaNO3

FeSO4

 

琼脂

 

0.1 g

0.5 g

3 g

0.01 g

2 g

15 g

加至1 L

 

(2)科研人员将采集的果园土壤放入无菌水中,震荡混匀,制成悬液。为获得较均匀分布的单菌落,还需要将悬液进行____________,用________法接种于固体培养基上。接种后的培养基________状态放入培养箱。

(3)选择单菌落数目适宜的培养基,加入一定浓度的刚果红溶液(果胶与刚果红结合后显红色),一段时间后观察并比较菌落和________直径的比值,筛选果胶酶高产菌株。

(4)将获得的菌株进行液体培养后,从培养液的

_______________________________________________________________________

(填“上清液”或“沉淀物”)获得粗提的果胶酶。将一定量的粗提果胶酶与适量果胶溶液混合,一定时间后测定吸光值来测定酶活性。进行吸光值测定时,需将________________________与等量果胶溶液混合,作为实验的对照。